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糖二磷酸钠含量测定固体复合酶试剂法公式计算出的:果糖二磷酸钠(%)是相当于标示含量的百分数吗
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更新时间:2024-03-29 21:39:13
问题描述:

糖二磷酸钠含量测定固体复合酶试剂法公式计算出的:果糖二磷酸钠(%)是相当于标示含量的百分数吗

马跃渊回答:
  固体复合酶试剂法   (1)试剂空白酶溶液:取固体复合酶(酶活力测定方法见注1,活力应符合规定)60mg,用盐酸三乙醇胺缓冲液(取三乙醇胺17.5g,加水约200ml,加盐酸4ml,混匀,加乙二胺四乙酸二钠3.7g,溶解后,用2mol/L氢氧化钠溶液或2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.6,加水稀释至250ml.滤过后4℃保存,一周内使用.)溶解并稀释至20ml.垂熔漏斗过滤,4℃保存,两天内使用.   测定酶溶液:取空白酶溶液10ml,加还原型辅酶Ⅰ(NADH)3.0mg,溶解后4℃保存,两天内使用.   (2)供试品溶液的制备取本品适量,精密称定,加水溶解并制成每1ml约含0.4mg(按无水物计)的溶液.   (3)测定法精密量取盐酸三乙醇胺缓冲液2ml,测定酶溶液1ml,置石英吸收池中;另精密量取上述缓冲液2ml,空白酶溶液1ml置另一吸收池,作为空白,摇匀,静置15分钟,照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版二部附录ⅣA),在340nm波长处测定吸光度A1.各池再分别精密加入供试品溶液0.1ml,摇匀,于20℃~25℃放置10分钟,在340nm的波长处测定,直至吸光度基本不变,读取吸光度A2.求出吸光度差值ΔA(ΔA=A1-1.0333A2),按下式计算,即得.   式中3.0为加入供试品溶液前样品池中溶液的体积(ml);   6.29103为还原型辅酶Ⅰ(NADH)的摩尔吸收系数;   2为果糖二磷酸钠反应系数;   406.06为C6H11Na3O12P2的分子量;   0.1为供试品溶液加入体积(ml);   W为供试品的取样量(mg)(以无水物计).   混悬液酶试剂法   (1)试剂盐酸三乙醇胺缓冲液(0.4mol/L,pH7.6):取盐酸三乙醇胺18.6g,加水200ml溶解,加乙二胺四乙酸二钠3.7g,溶解后,用2mol/L氢氧化钠溶液(约18ml)调节pH值至7.6,加水稀释至250ml.或取三乙醇胺17.5g,加水约200ml,加盐酸4ml,混匀,加乙二胺四乙酸二钠3.7g,溶解后,用2mol/L氢氧化钠溶液或2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.6,加水稀释至250ml.滤过后4℃保存,一周内使用.   还原型辅酶Ⅰ(NADH)溶液:取NADH二钠盐7mg,溶于2ml盐酸三乙醇胺缓冲液(pH7.6)中.4℃保存.   3-磷酸甘油脱氢酶-磷酸丙糖异构酶混悬液(GDH/TIM):取3-磷酸甘油脱氢酶混悬液(GDH)与磷酸丙糖异构酶混悬液(TIM)适量,用3.2mol/L硫酸铵溶液(pH6)稀释成每1ml约含GDH310U和TIM1550U的溶液.4℃保存.   醛缩酶混悬液(ALD):取醛缩酶混悬液(ALD)适量,用3.2mol/L硫酸铵溶液(pH6)稀释成每1ml中约含ALD90U的溶液.   (2)供试品溶液的制备取本品适量,精密称定,加水溶解并制成每1ml约含0.2mg(以无水物计)的溶液.   (3)测定法精密量取盐酸三乙醇胺缓冲液(pH7.6)3.0ml,供试品溶液0.1ml,还原型辅酶Ⅰ溶液0.05ml,甘油磷酸脱氢酶/磷酸丙糖异构酶混合混悬液0.02ml,置1cm吸收池中,摇匀,放置15分钟;另取盐酸三乙醇胺缓冲液(pH7.6)3.15ml,甘油磷酸脱氢酶/磷酸丙糖异构酶混合混悬液0.02ml,置另一吸收池中,摇匀,作为空白,照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版二部附录ⅣA),在340nm波长处测定供试品溶液的吸光度A1,再在每池中加醛缩酶混悬液0.02ml,摇匀,于20℃~25℃放置约5分钟,在340nm波长处测定供试品池的吸光度,直至吸光度基本不变读取吸光度A2.求出吸光度差值ΔA(ΔA=0.9937A1-A2),按下式计算,即得.   果糖二磷酸钠(%)=   式中0.9937为3.17/3.19;   3.19为样品池中溶液的最终体积(ml);   6.29103为还原型辅酶Ⅰ(NADH)的摩尔吸收系数;   2为果糖二磷酸钠反应系数;   406.06为C6H11Na3O12P2的分子量;   0.1为供试品溶液加入体积(ml);   W为供试品的取样量(mg)(以无水物计).
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